Медицина 2.0

Световая микроскопия предназначена для изучения окрашенных препаратов, которые сильно поглощают свет.

При необходимости изучать живые неокрашенные клетки используют фазово-контрастную или темноподьную микроскопию.

Фазово-контрастную микроскопию проводят с помощьюфазово-контрастного устройства (фазовый объектив и фазовый конденсор), которое преобразует невидимые фазовые колебания в амплитудные которые наш глаз различает. Это устройство может быть установлено на любом световом микроскопе.

Темнопольная микросколия проводится с помощью тем но польного конденсора, который имеет затемненную среднюю часть, поэтому центральные лучи задерживаются. На препарат попадают боковые лучи. Наблюдаемые микроорганизмы кажутся ярко светящимися на темном фоне.

Темнополъную и фазово-контрастную микроскопию применяют для прижизненного изучения подвижных микроорганизмов: вибрионов, лептоспир, спирохет.

Люминесцентная микроскопия основана на использовании явления флюоресценции. Применяют специальные люминесцентные микроскопы или приспособления к обычным микроскопам. Так как большинство микроорганизмов не обладает собственной люминесценцией, то их предварительно окрашивают (флюорохромируют) сильно разведенными растворами специальных красителей (флюорохромы), которые связываются с определенными структурами клетки.

Люминесцентную микроскопию применяюттакже для выявления антигенов и антител. С этой целью используют метод иммунофлюоресценцин (реакцию иммунофлюоресценции - РИФ). Этот метод позволяет выявить в препарате микробы, содержащие определенные антигены. Для их обнаружения необходимо иметь специфические люминесцирующие сыворотки, содержащие антитела к этим антигенам. Для получения флюоресцирующих (люми-несцирующих) сывороток к антителам специфических иммунных сывороток химическим путем присоединяют молекулы флюорохромов.

Постановка реакции: на фиксированный препарат во влажной камере наносят люминесцирующую сыворотку, инкубируют, промывают раствором хлорида натрия, высушивают и рассматривают в люминесцентном микроскопе. Если о препарате есть микробы, содержащие антиген, антитела к которому присутствуют в люминесцирующей сыворотке, они ярко светятся. Остальные микробы не люминесцируют.

Электронная микроскопия (ЭМ)

В электронном микроскопе пучок света заменен потоком электронов. Разрешающая способность электронных микроскопов от 0,01 до 0,1 нм. Движение электронов происходит в вакууме. Исследуемый материал наносят на тонкие пленки и помещают на пути потока электронов. ЭМ применяют для изучения структуры микробных клеток, для изучения вирусов, бактериофагов. Наиболее широко применяется просвечивающая (трансмиссивная) и сканирующая ЭМ. Просвечивающая ЭМ применяется для изучения ультратонких срезов микробов, тканей, для изучения строения мелких объектов (вирусов, жгутиков, клеточной стенки бактерий и грибов и т. д.), сканирующая микроскопия применяется для изучения поверхности объекта.

Основные свойства микроскопов:

— Увеличивающая способность. Зависит от увеличения окуляра и увеличения объектива, и равна их произведению.

- Разрешающая способность - минимальное расстояние между двумя точками, позволяющее видеть эти точки раздельными. Зависит от числовой апертуры объектива и длины волны света.

Увеличивающая способность световых микроскопов - около 1000, разрешающая способность — около 0,2 мкм.

Иллюстрация к статье: Яндекс.Картинки